ELISpot应用
1.疫苗研发
ELISpot检测已经成为评价疫苗细胞免疫反应最有效的指标之一(HarropRet.al.,)。疫苗的保护效果可以分为两部分:体液免疫保护和细胞免疫保护。有效的疫苗不仅能够激发强烈的体液免疫,也能激发有效的细胞免疫(HolmgrenJet.al.,b)。
?艾滋病疫苗研发与临床实验
艾滋病疫苗的主要功效应该表现在激起宿主病毒特异性的细胞免疫上。利用ELISpot检测细胞因子如IFN-g可以了解针对HIV特异的CTL应答及相关免疫信息。
?乙肝治疗性疫苗研究与临床试验
用ELISpot技术来对乙肝疫苗的疗效进行评估,另外也用ELISPOT技术来研究这些疫苗服役不同佐剂,甚至药物(Dahmen,A.et.al.,)的免疫效果。
?癌症治疗性疫苗研究与临床试验
癌症的发生与发展是机体细胞免疫机能减弱的结果。增强机体针对癌细胞的特异性细胞免疫反应是癌症治疗的重要措施之一。这些治疗性肿瘤疫苗的疗效评估也离不开ELISPOT检测技术。
?其它疫苗研究
目前研发的疫苗包括HPV疫苗(Mahdavi,A.et.al.,)、HCV疫苗(et.al.,)、流感疫苗、禽流感疫苗、戊肝疫苗、SARS疫苗(Gillim-Ross,L.et.al.,)小儿偏肺病毒metapneumovirus疫苗(Buchholz,U.J.et.al.,)甚至包括自身免疫性疾病疫苗等等等等。
2.临床应用
?结核病诊断
结核病诊断是ELISpot检测技术用到医学诊断领域的第一个成功典范。据世界卫生组织年统计,全球有1/3的人口感染过结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis),其中每年有8百万人发病,3百万人死亡(Dye,C.et.al.,)。更严重的是,结核病现在还有和艾滋病并发的趋势,使得治疗难上加难(Corbett,E.L.et.al.,)。诊断是治疗的前提,如果能够早期诊断,结核病的危害会小得多。
ELISpot技术带来了结核病早期诊断的革命。其一,由于ELISpot方法采用结核分枝杆菌特异性的多肽,可以避免卡介苗注射者的交叉反应;其二,由于ELISpot检测的是病人当下的细胞免疫水平,可以有效区别健康的TB携菌者与发病的TB活动病人。
?型糖尿病诊断
I-型糖尿病属于自身免疫性疾病,该病患者自身的T细胞会攻击胰岛细胞,造成胰岛细胞的死亡和胰岛素的分泌不足。I-型糖尿病的ELISpot诊断即是用一道细胞特异性抗原刺激PBMC,根据IFN-γ阳性的频率判定自身免疫反应的强弱。文献表明,ELISpot诊断可以提供最终的判定依据(MeierhoffGet.al.,)。而对有糖尿病史的家族,做ELISpot检测,甚至可以在疾病发作之前5-10年作出预测(KarlssonFaresjoMGet.al.,;SeisslerJet.al.,)。这对于指导病人的日常生活,提高治疗效果有着重要的现实意义。
?其它自身免疫性疾病诊断
自身免疫性疾病大多数都是早期诊断困难,确诊要等到发病之后。但是一发病,身体各器官的伤害已经成为既定事实,治疗困难,并且往往很难恢复到正常水平。基于ELISpot技术的细胞免疫检测为这些疾病的早及诊断带来了曙光。文献表明,在多发硬化症(MoldovanIRet.al.,)、系统性红斑狼疮(KalsiJKet.al.,)、牛皮癣/银屑病(SigmundsdottirHt.al.,)、结核病(RestrepoBI)、自身免疫性心肌炎(MaierRet.al.,)、自身免疫性感音性耳聋(SolaresCAet.al.,)、风湿性关节炎(KlattTet.al.,)、视神经脊髓炎(CorrealeJet.al.,)等等疾病的诊断、病因查找中,ELISPOT检测可以提供非常重要的信息,甚至成为最终指标。
3.临床治疗指导与疗效评估
在人类的疾病谱中,有一大类或直接或间接与免疫系统相关。直接相关的包括各种免疫缺陷和自身免疫性疾病;间接相关的包括各种获得性免疫缺陷、免疫耐受、和获得性自身免疫疾病。针对这一类疾病的根本治疗措施是恢复人体正常的免疫机能,包括体液免疫机能与细胞免疫机能。评估各种药物、生物制剂和其它治疗手段的疗效,就要检测治疗前后病人的细胞免疫水平。相对临床采取的其它检测细胞免疫手段而言,ELISpot在临床治疗指导与疗效评估方面有独特优势和巨大的潜力。这些领域包括:乙肝治疗、癌症治疗、其它免疫相关性疾病治疗评估。
4.器官移植
免疫排斥是器官移植最大的障碍,直接关系到手术的成功率和病人的预后。ELISpot检测可以全程参与到器官移植研究中去。
移植之前,可以用ELISpot对器官供体与受体做免疫相容性检测。如果HLA匹配,则供受体细胞之间相容性好,较少会刺激物斑点,提示移植手术成功率高,反之亦然。
在器官移植手术后,用ELISpot监视患者体内的免疫排斥反应,可以有针对性的用药,避免盲目的使用免疫抑制剂(TungTHet.al.,)。这对于增加移植手术的成功率,延长移植器官的存活率,提高病人的生活质量意义重大(vanBesouwNMet.al.,;TamburARet.al.,)。类似的ELISpot免疫监视也见于基因治疗的病人(WhitesideTLet.al.,)。
5.生物工程应用
ELISPOT技术还可以用于生物工程,成为一项生物工程技术。
?B细胞杂交瘤筛选
?T细胞表位肽筛选
?化合物与药物免疫性反应筛选
6.基础研究
ELISpot技术本来就是在基础研究中创立和发展起来的。生物学和医学基础研究的日新月异,ELISPOT有不可磨灭的功勋。但也正是由于基础研究的快速发展,ELISpot的应用广,所以才难于分门别类。客观地说,在一切免疫学研究的前沿领域,ELISpot都是最有力的研究工具之一。比如研究人体的免疫系统功能,研究Th0/Th1/Th2细胞转换分析(OttPAet.al.,),研究机体的过敏机制(BordignonVet.al.,;ChapovalSPet.al.,),研究癌症的免疫机制(AndersenMHet.al.,;Alix-PanabieresCet.al.,),研究和筛选有效的T细胞表位肽(AnthonyDDet.al.,)等,可谓名目繁多,不一而足。ELISPOT技术在基础研究方面所受的限制不在于技术本身,而在于我们的想象能力与创新思维。
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